銳賽生物

線粒體膜電位檢測

Membrane Potential Detection

服務介紹

大量的研究表明線粒體與細胞凋亡密切相關，其中線粒體跨膜電位（MMP）的下降，被認為是細胞凋亡級聯反應過程中最早發生的事件之一。它發生在細胞核凋亡特征（染色質濃縮、DNA斷裂）出現之前,一旦線粒體跨膜電位崩潰，則細胞凋亡不可逆轉。

實驗原理

JC-1是一種碳氰化合物類陽離子熒光染料，可作為檢測線粒體跨膜電位指示劑。JC-1在細胞內以聚合體和單體兩種不同的物理形式存在，分別處于不同的熒光發射峰。當JC-1 濃度低或膜電位水平低時，主要以單體形式存在，激發波長為527nm，呈綠色熒光；當JC-1濃度升高或線粒體膜電位水平較高時，形成聚合物，發出紅色的熒光，激發波長為590nm。當細胞發生凋亡時，線粒體跨膜電位被去極化，JC-1從線粒體內釋放，紅光強度減弱，以單體的形式存在于胞質內發綠色熒光，根椐這一特征就可以檢測線粒體膜電位的變化。

實驗流程

1. 細胞培養；

2. 用適當的方法誘導細胞凋亡，同時設立陰性對照組和陽性對照組，收集細胞；

3. 用PBS洗滌細胞三次，收集不多于1×10⁶的細胞；

4. 取100 μL 10×Incubation Buffer加900μL滅菌去離子水稀釋成1×Incubation Buffer，混勻并預熱至37℃；

5. 吸取500 μL 1×Incubation Buffer，加入1μL JC-1，渦旋混勻配成JC-1工作液；

6. 取500 μL JC-1工作液將細胞均勻懸浮，37℃，5% CO2的培養箱中孵育15~20min。

7. 室溫離心（2000rpm,5min）收集細胞，用1×Incubation Buffer洗兩次；

8. 吸取500 μL 10×Incubation Buffer重新懸浮細胞；

9. 流式細胞儀檢測，分析。

客戶提供

細胞株(凍存株或培養好的細胞)，相關藥品或MMP檢測試劑盒（可代購）

我們提供

實驗步驟、結果圖、數據結果和分析報告

實驗周期：1-2周，具體需要根據細胞生長情況及實驗內容而定。

實驗結果展示

線粒體細胞膜電位檢測結果圖