銳賽生物

細胞培養

cell culture

實驗原理

細胞培養是采用無菌操作的方法，模擬動物體內的生理條件，在體外進行培養．使其不斷地生長、繁殖，從而觀察細胞的增殖、分化以及細胞衰老等過程的生命現象。常見的細胞培養方式可分為貼壁和懸浮兩種。細胞培養的常規操作包括：1）細胞的接種和傳代；2）細胞計數；3）細胞的復蘇和凍存。常見的細胞培養類型見圖7.1。

圖7.1常見的細胞培養類型

            A：三種常見的細胞形態；

B ：有限傳代細胞系和無限傳代細胞系

技術應用

細胞培養至最佳狀態后可進行各種處理，如1）加藥處理；2）質粒轉染；3）病毒感染；4）培養條件的改變等，進而對細胞功能進行各項檢測，并對細胞信號通路蛋白進行表達分析及功能研究。

實驗流程

實驗結果展示

               圖7.2 原代細胞培養成功案例

TROUBLESHOOTING

常見問題FAQ

Q:細胞的運送有哪些注意事項?

A：通常分為細胞凍存株和培養細胞兩種運送方式，

注意事項如下:

細胞凍存株運送:將凍存的細胞株放在盛有液氮或干,冰的特殊容器中保存運送,不宜長時間運輸。注意裝有液氯的保溫瓶不要擰緊,以防止瓶內氣壓過大無法開啟甚至引起爆炸。

培養細胞運送:一般選擇生長良好的細胞,鋪板密度以40%-60%為宜,去掉原培養液,補充新培養液至瓶頸部,保留微量空氣(注意:若空氣留量過多,運輸時大氣泡來回流動對細胞狀態有影響),擰緊瓶蓋,并用膠帶密封,放在用棉花等做防震防壓處理的,運送盒內。一般快遞周期3天內可保證細胞狀態沒有,問題,注意冬天氣溫過低無法采用此方法快遞。

Q：關于提供的細胞需提供哪些培養信息?

A :請告知細胞的具體名稱及來源、培養基類型及血清濃度、培養溫度及Co濃度、細胞增殖時間、傳代方式,我們會根據以上信息對細胞進行培養、擴增和凍存工作。

Q :原代細胞的分離培養相對常規細胞系的培養有哪些注意要點?

A :凡是來源于胚胎、組織器官及外周血,經特殊分離方法制備而來的原初培養的細胞稱之為原代細胞。原代細胞的培養有其難度,區別于常規細胞系注意要點如下：

1) 細胞的取材來源:取材應注意組織類型、分化程度、年齡等,一般來講,胚胎組織較成熟個體組織容易培養,分化低的較分化高的組織容易生長,腫瘤組織較正常組織容易培養。

2) 取材應嚴格無菌:確保所取材料及器皿手術器材無菌并在無菌條件下操作。

3) 防止鄰近組織細胞的污染:分離時要仔細去除所取材料上的血液(血塊)、脂肪、壞死組織及結締組織,可根據客戶要求進行細胞的免疫化學檢測。

4) )組胞量少且狀態難以調整:受到取材困難等因素的影響,獲得的細胞量少,細胞狀態不佳造成的細胞增殖緩慢往往造成實驗室人員長時間進行細胞狀態調整,無法獲得足量的細胞進行后城檢測實。

Q ：:常見的細胞培養基有哪些?

Q :常見的綢胞污染類型有哪些?

A :常見的細胞污染類型有細菌,真菌,支原體,病毒,酵母污染。如果客戶接收到的細胸在培養過程中遇到細胞污染,請盡快提供細胞污染的照片,并且詳細告知污染產生的時間,是否為個別孔污染等詳細信息,以便于我們分析確認,在最短的時間內為您解決污染問題。

Q :為什么培養的細胞要及時傳代?而哪些細胞則不再發生增值？

A :體外培養的細胞大多具有生長接觸卻制的特性,也就是說當一個細胞被其他綢胞包圍的時候,它就會停止生長,及時傳代后,細胞的生長得以繼續。因此客戶需詳細告知我們細胞的消化時間,傳代比例,增殖時間等重要的信息。對于高度分化的細胞如紅細胞,神經細胞己喪失了分裂能力不再進行增值，如果細胞量提供有限的話,要根據實驗求計劃好所需的組胞量,以防止后續實驗無法順利進行。

參考文獻

1. R.Ian Freshney. Culture of Animal Cells：A Manual of Basic Technique and Specialized Applications[M].Wiley-Blackwell Press,2011.

2. David L.Spector,Robert D. Goldman, Leslie A. Leinwand. Cells: a laboratory manual[M]. Cold Spring HarborLabrotary Press,1998.