銳賽生物

RNAi病毒包裝及篩選

package virus

實驗原理

與化學合成的siRNA和shRNA質粒載體相比，利用慢病毒或腺病毒表達shRNA，一方面可用于感染依靠傳統轉染試劑難于轉染的細胞系如原代細胞、懸浮細胞，提高shRNA導入細胞的效率，另一方面病毒介導可延長RNAi的時間，尤其慢病毒感染后可以整合到宿主細胞基因組，進行穩轉篩選。

圖2.4慢病毒介導RNAi原理示意圖

技術應用

技術應用基因功能的體內外研究

病理機制研究

實驗流程

實驗結果展示

圖 1 相對定量 PCR 檢測 3 組 shRNA 慢病毒感染組相對陰性對照組目的基因的干擾效果

TPOUBLESHOOTING

常見問題 FAQ

Q：化學合成siRNA，shRNA質粒和shRNA病毒進行細胞實驗的優缺點？

Q：我提供靶細胞為什么需進行預實驗？需檢測哪些內容？

A：客戶提供的靶細胞進行培養后確定其狀態，我們會進行靶基因的表達豐度檢測，確認靶基因的表達量，然后采用慢病毒或腺病毒進行細胞的 MOI 值摸索，確認靶細胞用何種病毒預計采用多大的病毒量進行感染實驗。若預實驗結果表明細胞中靶基因的本底表達本身很低則不建議進行干擾篩選工作。

Q ：病毒介導的RNAi篩選工作公司作何保證？

A：首先預實驗摸索客戶提供靶細胞的 MOI 值，感染效率達到 80% 以上，從而確定病毒的包裝類型。然后設計三個干擾靶點并進行病毒包裝工作，感染靶細胞后，我們通過 qPCR 檢測，確保至少一個靶點的干擾效果大于80%。實驗結束后最佳干擾靶點的腺病毒可根據客戶的要求進行擴增；最佳干擾靶點的慢病毒可以根據客戶的要求大量包裝后提供給客戶。

參考文獻

1. Buchschacher GL Jr, Wong-staal F. Development of Lentiviral Vectors for Gene Therapy for Human Diseases.Blood2000,95(8):2499-2504.